嘌呤代谢失调引起的高尿酸血症严重威胁人体健康。传统降血尿酸的方法需服用抑制尿酸生成的药物,但服用药物价格较高且有副作用。乳酸菌作为人体肠道内正常菌群,能够调控血脂、血糖等代谢过程,水解食物中的核苷,竞争性减少肠道上皮细胞对核苷的吸收,从而减少尿酸合成,在治疗高尿酸血症上具有药物治疗无可比拟的优点。本论文从不同来源样品中分离出172株乳酸菌,以鸟苷的降解速率和黄嘌呤氧化酶的抑制能力为主要指标进行筛选,并考察了所筛选菌株的发酵特性,为后续开发利用奠定基础。主要研究内容和结果如下。(1)不同来源乳酸菌的分离与鉴定。从健康人群肠道、发酵食品中分离出239株菌株,对符合乳酸菌形态的菌株进行产酸实验和16s rDNA鉴定,共鉴定乳酸菌菌株172株。从长寿老人肠道、婴儿肠道和发酵食品鉴定出的乳酸菌分别有25株、73株和74株,其中老人肠道和发酵食品分离的菌株中植物乳杆菌所占比例较高,分别为64.00%和64.86%,而来源于婴儿肠道样品的乳酸菌中鼠李糖乳杆菌所占比例较高,为50.68%。(2)乳酸菌降解核苷能力研究。通过体外考察研究发现,筛选出的172株乳酸菌均没有直接降解尿酸的能力。在降解核苷能力的测定中,来源于长寿老人肠道的乳酸菌,68.0%的菌株可以完全降解鸟苷和肌苷,显著高于婴儿肠道来源(5.48%,p<0.05)的乳酸菌。从健康老人肠道、婴儿肠道和发酵食品来源样品中共得到了 56株可以完全降解鸟苷和肌苷的乳酸菌,筛选出16株可以在30 min内将0.72 mmol/L鸟苷完全降解为鸟嘌呤的乳酸菌,其降解速率≥1.43 mmol/(L·h),其中老人肠道来源菌株8株,婴儿肠道来源1株,发酵食品来源菌株7株。(3)乳酸菌抑制黄嘌呤氧化酶能力研究。对16株降解核苷速率相对较快的菌株进行了黄嘌呤氧化酶(XO)抑制率的测定,结果表明,有9株菌株的MRS上清液的XO抑制率超过90%,有11株菌株发酵菊苣上清液的XO抑制率超过80%。综合筛选得到3株来源于长寿老人肠道的植物乳杆菌S7BA、56A、67A,2株来源于发酵食品的植物乳杆菌fA、wy02A和1株来源于婴儿肠道的发酵乳杆菌Q23A,这6株菌的MRS发酵液XO抑制率均大于90%,同时菊苣发酵液XO抑制率均大于80%。其中效果较好的是植物乳杆菌S7BA和发酵乳杆菌Q23A,其在MRS发酵液中的抑制率分别为95.25%和96.56%,菊苣发酵液中的XO抑制率分别为96.22%和90.27%。同时发现,不同菌株MRS发酵液和菊苣发酵液的pH与XO的抑制率呈显著负相关,与发酵液中乳酸和乙酸含量之和呈显著正相关,初步确认了抑制XO活性的代谢产物为乳酸菌代谢产生的乳酸和乙酸。(4)筛选菌株的发酵特性研究。对筛选获得的6株菌株在脱脂乳中的发酵特性进行研究,发现除植物乳杆菌56A发酵48h未凝乳外,其余5株菌株均可以在48 h内凝乳,其中发酵乳杆菌Q23A和植物乳杆菌67A两株菌在发酵48 h时的pH分别为4.77和4.88,滴定酸度分别为110.89°T和93.81°T,相应的黏度分别为644.00 mPa.s和564.33 mPa.s,其中植物乳杆菌67A的发酵乳持水力最高,为49.14%。
基本信息
| 题目 | 具有潜在降尿酸能力乳酸菌的筛选及应用研究 |
| 文献类型 | 硕士论文 |
| 作者 | 王垚 |
| 作者单位 | 扬州大学 |
| 导师 | 顾瑞霞 |
| 文献来源 | 扬州大学 |
| 发表年份 | 2021 |
| 学科分类 | 基础科学,工程科技Ⅰ辑 |
| 专业分类 | 生物学,轻工业手工业 |
| 基金 | 国家自然科学基金(编号:31972094) |
| 分类号 | TS201.3 |
| 关键词 | 乳酸菌,高尿酸血症,核苷,黄嘌呤氧化酶,菊苣 |
| 总页数： | 73 |
| 文件大小： | 5695k |
论文目录
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 高尿酸血症 |
| 1.1.1 高尿酸血症概述 |
| 1.1.2 高尿酸血症治疗 |
| 1.2 益生乳酸菌 |
| 1.2.1 乳酸菌的益生功能 |
| 1.2.2 益生乳酸菌的应用 |
| 1.3 乳酸菌在降尿酸方面的应用 |
| 1.4 研究背景及内容 |
| 1.4.1 研究背景及意义 |
| 1.4.2 研究内容 |
| 第二章 乳酸菌的分离与鉴定 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 实验试剂 |
| 2.2.2 主要仪器 |
| 2.2.3 培养基及实验试剂配制 |
| 2.2.4 菌株分离、纯化与初步筛选 |
| 2.2.5 分子生物学鉴定 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 乳酸菌菌落特征分析 |
| 2.3.2 乳酸菌形态特征分析 |
| 2.3.3 长寿老人肠道源乳酸菌的16s rDNA鉴定 |
| 2.3.4 婴儿肠道源乳酸菌的16s rDNA鉴定 |
| 2.3.5 发酵食品源乳酸菌的16s rDNA鉴定 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 乳酸菌降解核苷能力研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 实验菌株 |
| 3.2.2 主要试剂 |
| 3.2.3 主要仪器 |
| 3.2.4 实验试剂配制 |
| 3.2.5 乳酸菌活化 |
| 3.2.6 乳酸菌尿酸降解能力测试 |
| 3.2.7 乳酸菌核苷与嘌呤含量测定 |
| 3.2.8 乳酸菌降解核苷能力分析 |
| 3.2.9 乳酸菌核苷降解速率测定 |
| 3.2.10 乳酸菌核苷降解相关性分析 |
| 3.2.11 数据统计分析 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 不同乳酸菌的尿酸降解能力研究 |
| 3.3.2 乳酸菌核苷嘌呤检测方法优化 |
| 3.3.3 长寿老人肠道源乳酸菌的核苷降解能力研究 |
| 3.3.4 婴儿肠道源乳酸菌的核苷降解能力研究 |
| 3.3.5 发酵食品源乳酸菌的核苷降解能力研究 |
| 3.3.6 不同乳酸菌的核苷降解速率研究 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 乳酸菌抑制黄嘌呤氧化酶能力研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 主要试剂 |
| 4.2.2 主要仪器 |
| 4.2.3 实验试剂配制 |
| 4.2.4 乳酸菌活化 |
| 4.2.5 黄嘌呤氧化酶抑制率测定 |
| 4.2.6 乳酸菌MRS发酵液上清对XO的抑制活性测定 |
| 4.2.7 乳酸菌MRS发酵上清液的乳酸、乙酸含量测定 |
| 4.2.8 乳酸菌菊苣发酵上清液对XO的抑制活性测定 |
| 4.2.9 乳酸菌菊苣发酵液上清的乳酸、乙酸含量测定 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 XO催化体系优化 |
| 4.3.2 乳酸菌发酵MRS上清液抑制XO能力研究 |
| 4.3.3 乳酸菌MRS发酵液上清的乳酸、乙酸含量 |
| 4.3.4 乳酸菌发酵菊苣上清液抑制XO能力分析 |
| 4.3.5 乳酸菌菊苣发酵液上清的乳酸、乙酸含量 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 具有潜在降尿酸效果的乳酸菌的应用研究 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 实验菌株 |
| 5.2.2 主要试剂 |
| 5.2.3 主要仪器 |
| 5.2.4 乳酸菌活化 |
| 5.2.5 乳酸菌耐酸耐胆盐测定 |
| 5.2.6 乳酸菌发酵乳pH的测定 |
| 5.2.7 乳酸菌发酵乳酸度的测定 |
| 5.2.8 乳酸菌发酵乳黏度的测定 |
| 5.2.9 乳酸菌发酵乳持水能力的测定 |
| 5.2.10 乳酸菌活菌数的测定 |
| 5.2.11 数据统计分析 |
| 5.3 结果与分析 |
| 5.3.1 不同乳酸菌的耐酸性和胆盐耐受性比较 |
| 5.3.2 不同乳酸菌的凝乳时间与活菌数 |
| 5.3.3 不同乳酸菌发酵过程中pH与酸度变化 |
| 5.3.4 不同乳酸菌发酵乳黏度及持水力的变化 |
| 5.4 本章小结 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
参考文献
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